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程序降溫盒使用經(jīng)驗分享

更新時間:2021-11-13      點擊次數(shù):2211
  凍存細胞時要緩慢冷凍,程序降溫,以提高細胞的存活率。目前普遍的做法是采用程序降溫儀或程序降溫盒,采用程序降溫儀價格昂貴、操作繁瑣,而程序降溫盒在生物學(xué)實驗室中廣泛使用,是細胞凍存盒類產(chǎn)品的經(jīng)典實驗耗材之一。
  程序降溫盒包括盒蓋、盒身和管槽,管槽置于盒身內(nèi),盒蓋蓋于盒身上且與盒身螺紋配合,還包括連接帶,連接帶一端與盒蓋連接,另一端與盒身連接;本實用新型設(shè)置了連接盒蓋與盒身的連接帶,使盒蓋與盒身不分離,減少了配對標(biāo)記這一步驟,減少了操作程序,使用更加方便;同時,本實用新型出入超低溫冰箱時,可手提連接帶,減少了手的接觸面積,減少或防止凍傷;另外,管槽與盒身螺紋配合,增加了密封度,防止了異丙醇揮發(fā)而導(dǎo)致的凍存效果變差。
  程序降溫盒使用經(jīng)驗分享:
  經(jīng)驗1:我們實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?,F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。
  經(jīng)驗2:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激數(shù)據(jù):眼睛-兔子100毫克/!請注意清理!
  經(jīng)驗3:應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達到刻度線,否則降溫效果會受到影響。
  經(jīng)驗4:凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環(huán)境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。
  程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細胞凍存的存活率,由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯,因此程序降溫盒也可以用于細胞復(fù)蘇。
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